Active Leptin (LEP) (APA084Hu01)

Лептин - гормон, синтезируемый адипоцитами, который регулирует энергетический баланс путем подавления чувства голода. Многие эффекты лептина опосредованы через нейроны, содержащие нейропептиды, и рецепторы нейропептидов в гипоталамусе. Хотя регуляция жировых запасов считается основной функцией лептина, он также участвует в других физиологических процессах, что подтверждается его синтезом в различных тканях помимо жировой клетки и наличием рецепторов к лептину на множестве типов клеток, отличных от гипоталамических. Кроме того, было установлено, что гексокиназа 3 лейкоцитов (HK3) взаимодействует с лептином (LEP). В связи с этим был проведен иммуноферментный анализ (ИФА) связывания для детекции взаимодействия между рекомбинантным человеческим LEP и рекомбинантным человеческим HK3. Кратко: LEP серийно разводили в фосфатно-солевом буфере (PBS) с добавлением 0,01% бычьего сывороточного альбумина (БСА), pH 7,4. Дубликатные пробы объемом 100 мкл вносили в лунки планшета, покрытые HK3, и инкубировали в течение 2 ч при 37 °C. После промывки лунок буфером PBST добавляли поликлональные антитела против LEP и инкубировали 1 ч, затем раствор удаляли и проводили трехкратную промывку. Далее вносили вторичные антитела, меченные пероксидазой хрена (HRP), после чего снова удаляли раствор и трехкратно промывали лунки. Добавляли субстратный раствор и инкубировали 15–25 мин при 37 °C. Реакцию останавливали добавлением 50 мкл стоп-раствора в каждую лунку и немедленно измеряли оптическую плотность при 450 нм. Активность связывания LEP и HK3 представлена на рисунке 1; наблюдалась дозозависимая динамика данного эффекта.