Active Leptin (LEP) (APA084Mu01)

Лептин - гормон, вырабатываемый адипоцитами и регулирующий энергетический баланс путем подавления чувства голода; многие его эффекты опосредованы нейронами, содержащими нейропептиды, и рецепторами нейропептидов в гипоталамусе. Хотя регуляция жировых запасов считается основной функцией лептина, он также участвует в других физиологических процессах, что подтверждается его синтезом в различных тканях помимо жировой и наличием рецепторов лептина на клетках разных типов, не только в гипоталамусе. Для детекции взаимодействия рекомбинантного лептина мыши (LEP) и рекомбинантного рецептора лептина человека (LEPR) был проведен функциональный иммуноферментный анализ (ИФА) связывания. Кратко: LEP серийно разводили в фосфатно-солевом буфере (PBS) с добавлением 0,01% бычьего сывороточного альбумина (БСА), pH 7,4. Дубликаты проб объемом 100 мкл переносили в лунки микротитрационного планшета, покрытые LEPR, и инкубировали в течение 2 ч при 37 °C. Лунки промывали буфером PBST и инкубировали в течение 1 ч с поликлональными антителами к LEP, после чего раствор удаляли и проводили трехкратную промывку. Затем лунки инкубировали с вторичными антителами, меченными пероксидазой хрена (HRP), после чего снова удаляли раствор и трижды промывали. После добавления субстратного раствора лунки инкубировали в течение 15–25 мин при 37 °C. В завершение в лунки добавляли по 50 мкл стоп-раствора и немедленно проводили измерение оптической плотности при 450 нм. Активность связывания LEP и LEPR представлена на рис. 1; значение EC50 для данного эффекта составило 0,26 мкг/мл.