Active Leukemia Inhibitory Factor (LIF) (APA085Mu01)

Фактор ингибирования лейкемии (LIF) представляет собой цитокин семейства интерлейкина-6, который модулирует рост клеток, подавляя их дифференцировку. Помимо этого, LIF участвует в стимуляции роста и дифференцировке различных типов клеток-мишеней, регуляции костного метаболизма, развитии кахексии, нейрогенезе, эмбриогенезе и воспалительных процессах. Поскольку рецептор колониестимулирующего фактора гранулоцитов (GCSFR) идентифицирован как партнер взаимодействия для LIF, для детекции данного взаимодействия был проведен иммуноферментный анализ связывания (ELISA) с использованием рекомбинантного мышиного LIF и рекомбинантного мышиного GCSFR. Кратко: LIF серийно разводили в фосфатно-солевом буфере (PBS) с добавлением 0,01% бычьего сывороточного альбумина (БСА, pH 7,4). Дубликатные пробы объемом 100 мкл вносили в лунки планшета, покрытые GCSFR, и инкубировали в течение 2 ч при 37 °C. После промывки лунок буфером PBST проводили инкубацию с поликлональными антителами против LIF в течение 1 ч, затем раствор удаляли и лунки промывали трехкратно. Далее следовала инкубация с вторичными антителами, конъюгированными с пероксидазой хрена (HRP), после чего лунки снова аспирировали и трехкратно промывали. После внесения субстратного раствора лунки инкубировали в течение 15–25 мин при 37 °C. Реакцию останавливали добавлением 50 мкл стоп-раствора в каждую лунку и немедленно измеряли оптическую плотность при длине волны 450 нм. Активность связывания LIF с GCSFR представлена на Рисунке 1; наблюдалась дозозависимая динамика данного эффекта. Активность связывания LIF с GCSFR.