Active Lipopolysaccharide Binding Protein (LBP) (APB406Hu01)

Белок, связывающий липополисахарид (LBP), представляет собой растворимый белок острой фазы, который связывается с бактериальным липополисахаридом (ЛПС) и инициирует иммунный ответ, презентируя ЛПС ключевым рецепторам распознавания образов на поверхности клеток - CD14 и TLR4. Белок, кодируемый данным геном, участвует в иммунологическом ответе острой фазы на инфекции, вызываемые грамотрицательными бактериями. Этот белок входит в семейство структурно и функционально родственных белков, включая BPI, холестерин-эфир-транспортирующий белок плазмы (CETP) и фосфолипид-транспортирующий белок (PLTP). Кроме того, кластер дифференцировки 14 (CD14) идентифицирован как партнер взаимодействия LBP; в связи с этим был проведен связывающий ИФА для детекции взаимодействия рекомбинантного человеческого LBP и рекомбинантного человеческого CD14. Кратко: LBP серийно разводили в фосфатно-солевом буфере (PBS) с добавлением 0,01% БСА (pH 7,4). Дубликатные пробы объемом 100 мкл вносили в лунки микропланшета, покрытые CD14, и инкубировали в течение 2 ч при 37 °C. Лунки промывали буфером PBST и инкубировали в течение 1 ч с поликлональными антителами к LBP, после чего раствор удаляли и проводили трехкратную промывку. Затем лунки инкубировали с вторичными антителами, меченными пероксидазой хрена (HRP), после чего раствор удаляли и снова проводили трехкратную промывку. После добавления субстратного раствора лунки инкубировали в течение 15–25 мин при 37 °C. В завершение в лунки добавляли по 50 мкл стоп-раствора и немедленно проводили измерение оптической плотности при 450 нм. Активность связывания LBP с CD14 представлена на рисунке 1; данный эффект носил дозозависимый характер.