Active Luteinizing Hormone (LH) (APA441Hu02)

Лютеинизирующий гормон (ЛГ) представляет собой гетеродимерный гликопротеин с молекулярной массой 42 кДа, состоящий из нековалентно связанных гликозилированных альфа- и бета-цепей. Альфа-субъединица (альфа-ХГ) также входит в состав фолликулостимулирующего гормона (ФСГ), тиреотропного гормона и хорионического гонадотропина. Уникальная бета-субъединица обусловливает специфическую биологическую активность белка и его взаимодействие с рецептором. ЛГ синтезируется и секретируется передней долей гипофиза; его секреция регулируется гонадолиберином гипоталамуса, однако также может стимулироваться эстрадиолом. Для оценки взаимодействия рекомбинантного человеческого гетеродимера альфа-ХГ/бета-ЛГ и рекомбинантного человеческого дофаминового рецептора D1 (DRD1) был проведен функциональный иммуноферментный анализ (ИФА) связывания. Кратко: биотинилированный гетеродимер альфа-ХГ/бета-ЛГ серийно разводили в фосфатно-солевом буфере (PBS) с добавлением 0,01% бычьего сывороточного альбумина (БСА, pH 7,4). Дубликаты проб объемом 100 мкл вносили в лунки планшета, покрытые DRD1, и инкубировали в течение 1 ч при 37°C. После трехкратной промывки лунок буфером PBST проводили инкубацию со стрептавидин-пероксидазой хрена (HRP) в течение 30 мин, затем раствор удаляли и лунки промывали пятикратно. После добавления субстратного раствора лунки инкубировали 15–25 мин при 37°C. В завершение в лунки добавляли по 50 мкл стоп-раствора и немедленно проводили измерение оптической плотности при 450 нм. Результаты связывания гетеродимера альфа-ХГ/бета-ЛГ с DRD1 представлены на рис. 1; значение EC50 для данного эффекта составило 0,158 мкг/мл.