Хемотаксическая активность рекомбинантного человеческого MIP-3α на клетках линии Jurkat
Макрофагальный воспалительный белок 3 альфа (MIP-3α), также известный как LARC (хемокин, регулируемый активацией и экспрессируемый в печени), Exodus-1 или CCL20, представляет собой CC-хемокин, обладающий селективной хемотаксической активностью в отношении лимфоцитов и дендритных клеток (ДК). MIP-3α продуцируется активированными клетками, включая моноциты, Т-клетки, эндотелиальные клетки, эпителиальные клетки и фибробласты, и экспрессируется в печени, легких и некоторых лимфоидных тканях. Данный хемокин реализует свои эффекты на клетки-мишени посредством связывания с хемокиновым рецептором CCR7. Он привлекает определенные клетки иммунной системы, включая дендритные клетки, В-клетки, взаимодействующие с антигеном, и центральные Т-клетки памяти, экспрессирующие CCR7. Для оценки хемотаксического эффекта рекомбинантного человеческого MIP-3α на клеточную линию Jurkat был проведен анализ хемотаксиса с использованием 24-луночной микрохемотаксической системы. Кратко: суспензию клеток Jurkat (200 мкл, концентрация 10⁶ клеток/мл в среде RPMI 1640 без добавления фетальной бычьей сыворотки) вносили в верхние камеры, а MIP-3α (в концентрациях 0,01; 0,1; 1; 10; 100 и 1000 нг/мл, разведенный в среде RPMI 1640 без сыворотки) добавляли в нижние камеры. Камеры разделяли поликарбонатным фильтром с размером пор 8 мкм. После инкубации при 37 °C в атмосфере с 5% CO₂ в течение 2 часов фильтр удаляли. Клетки, мигрировавшие в нижнюю камеру, визуализировали с помощью инвертированного микроскопа при малом увеличении (×100), после чего проводили подсчет мигрировавших клеток при большом увеличении (×400) случайным образом в пяти полях зрения для каждого фильтра. Результаты показали, что MIP-3α способен индуцировать миграцию клеток Jurkat. На Рисунке 1 представлены мигрировавшие клетки Jurkat в нижней камере, визуализированные при малом увеличении (×100). Для статистического анализа случайным образом выбирали пять полей зрения для каждой камеры и подсчитывали количество мигрировавших клеток при большом увеличении (×400); статистические данные приведены на Рисунке 2. Оптимальная хемотаксическая активность рекомбинантного человеческого MIP-3α наблюдается в диапазоне концентраций 1–10 нг/мл.
