Active Macrophage Inflammatory Protein 3 Alpha (MIP3a) (APA095Hu02)

Макрофагальный воспалительный белок 3 альфа (MIP3a), также известный как хемокиновый лиганд 20 (CCL20) или регулируемый активацией печени хемокин (LARC), представляет собой небольшой цитокин семейства CC-хемокинов. Он обладает выраженной хемотаксической активностью в отношении лимфоцитов и слабой - в отношении нейтрофилов. MIP3a участвует в формировании и функционировании лимфоидных тканей слизистых оболочек, обеспечивая хемотаксис лимфоцитов и дендритных клеток к эпителиальным клеткам, окружающим эти ткани. Белок экспрессируется в различных тканях, включая лимфоциты периферической крови, лимфатические узлы, печень, аппендикс и эмбриональные легкие. Экспрессия MIP3a индуцируется микробными факторами, такими как липополисахарид (ЛПС), и провоспалительными цитокинами, включая фактор некроза опухоли и интерферон-γ, тогда как ИЛ-10 подавляет её. Кроме того, установлено, что интерлейкин-1 альфа (ИЛ-1α) взаимодействует с MIP3a. Для детекции этого взаимодействия был проведен связывающий иммуноферментный анализ (ИФА) с использованием рекомбинантного человеческого MIP3a и рекомбинантного человеческого ИЛ-1α. Кратко: MIP3a серийно разводили в фосфатно-солевом буфере (PBS) с добавлением 0,01% бычьего сывороточного альбумина (БСА, pH 7,4). Дубликаты проб объемом 100 мкл вносили в лунки планшета, покрытые ИЛ-1α, и инкубировали в течение 2 ч при 37 °C. После промывки буфером PBST лунки инкубировали в течение 1 ч с поликлональными антителами против MIP3a, затем раствор удаляли и проводили трехкратную промывку. Далее следовала инкубация с вторичными антителами, меченными пероксидазой хрена (HRP), после чего раствор удаляли и выполняли пятикратную промывку. После добавления субстратного раствора лунки инкубировали в течение 15–25 мин при 37 °C. В завершение в лунки добавляли по 50 мкл стоп-раствора и немедленно проводили измерение оптической плотности при 450 нм. Результаты связывания MIP3a и ИЛ-1α представлены на рисунке 1; эффект носил дозозависимый характер, значение EC50 составило 0,676 мкг/мл.