Active Macrophage Migration Inhibitory Factor (MIF) (APA698Hu01)

Фактор ингибирования миграции макрофагов (MIF), также известный как фактор, ингибирующий гликозилирование (GIF), L-допахром-изомераза или фенилпируват-таутомераза, представляет собой белок, классифицируемый как провоспалительный цитокин. MIF является важным регулятором врожденного иммунитета, участвуя в клеточном иммунном ответе, иммунорегуляции и воспалительных процессах. Данный белок регулирует функцию макрофагов в системе защиты организма посредством подавления противовоспалительного действия глюкокортикоидов. Этот лимфокин образует комплекс с белком JAB1 в цитозоле вблизи периферической плазматической мембраны, что может указывать на его роль в сигнальных путях интегринов. Кроме того, инвариантная цепь главного комплекса гистосовместимости II класса (MHCDG) была идентифицирована как партнер взаимодействия MIF; в связи с этим был проведен связывающий иммуноферментный анализ (ИФА) для детекции взаимодействия рекомбинантного человеческого MIF и рекомбинантного человеческого MHCDG. Кратко: MIF серийно разводили в фосфатно-солевом буфере (PBS) с добавлением 0,01% бычьего сывороточного альбумина (БСА, pH 7,4). Дубликатные пробы объемом 100 мкл вносили в лунки планшета, покрытые MHCDG, и инкубировали в течение 2 ч при 37 °C. Лунки промывали буфером PBST и инкубировали в течение 1 ч с поликлональными антителами к MIF (anti-MIF pAb), после чего содержимое удаляли и проводили трехкратную промывку. Затем добавляли вторичное антитело, конъюгированное с пероксидазой хрена (HRP), удаляли раствор и снова промывали лунки три раза. После внесения субстратного раствора лунки инкубировали в течение 15–25 мин при 37 °C. В завершение в лунки добавляли по 50 мкл стоп-раствора и немедленно измеряли оптическую плотность при длине волны 450 нм. Активность связывания MIF с MHCDG представлена на Рисунке 1; данный эффект носил дозозависимый характер. Активность связывания MIF с MHCDG.

Фактор ингибирования миграции макрофагов (MIF) представляет собой лимфокин, участвующий в клеточном иммунитете, иммунной регуляции и воспалении; он сверхэкспрессируется при различных опухолях и рассматривается как молекулярное звено между хроническим воспалением и раком. Для оценки влияния MIF на пролиферацию клеток клетки рака молочной железы MCF-7 высевали в трех повторностях в 96-луночные планшеты из расчета 5000 клеток на лунку, давали им прикрепиться, после чего среду заменяли на бессывороточную на ночь, а затем на стандартную среду DMEM с 1% сыворотки перед добавлением рекомбинантного человеческого MIF в различных концентрациях. После 96 часов инкубации клетки исследовали с помощью инвертированного микроскопа, а пролиферацию оценивали с использованием набора Cell Counting Kit-8 (CCK-8): в каждую лунку добавляли 10 мкл раствора CCK-8, затем после инкубации планшета в течение 1–4 часов при 37°C измеряли оптическую плотность при длине волны 450 нм на планшетном ридере. Результаты микроскопии клеток MCF-7 после 96-часовой инкубации с MIF представлены на рисунке 2, а данные оценки жизнеспособности клеток методом CCK-8 после 96-часовой инкубации с рекомбинантным MIF - на рисунке 3. Было установлено, что MIF достоверно повышает жизнеспособность клеток MCF-7. (A) Клетки MCF-7, культивируемые в среде DMEM и стимулированные MIF в концентрации 10 нг/мл в течение 96 ч; (B) Нестимулированные клетки MCF-7, культивируемые в среде DMEM в течение 96 ч. Пролиферация клеток MCF-7 после стимуляции MIF.

На рисунке представлена пролиферация клеток MCF-7 после стимуляции фактором миграции макрофагов (MIF).