Active Macrophage Migration Inhibitory Factor (MIF) (APA698Hu02)

Макрофагальный миграционный ингибирующий фактор (MIF), также известный как ингибирующий гликозилирование фактор (GIF), L-допахром-изомераза или фенилпируват-тавтомераза, представляет собой белок, классифицируемый как воспалительный цитокин. MIF является важным регулятором врожденного иммунитета, участвует в клеточном иммунитете, иммунорегуляции и воспалении. Он регулирует функцию макрофагов в системе защиты хозяина посредством подавления противовоспалительного действия глюкокортикоидов. Данный лимфокин образует комплекс с белком JAB1 в цитозоле вблизи периферической плазматической мембраны, что может указывать на его роль в сигнальных путях интегринов. Кроме того, инвариантная цепь главного комплекса гистосовместимости II класса (MHCDG) была идентифицирована как партнер взаимодействия MIF; в связи с этим был проведен иммуноферментный анализ связывания для детекции взаимодействия рекомбинантного человеческого MIF и рекомбинантного человеческого MHCDG. Кратко: MIF серийно разводили в фосфатно-солевом буфере (PBS) с добавлением 0,01% бычьего сывороточного альбумина (БСА, pH 7,4). Дубликатные пробы объемом 100 мкл вносили в лунки микропланшета, покрытые MHCDG, и инкубировали в течение 2 ч при 37 °C. Лунки промывали буфером PBST и инкубировали в течение 1 ч с поликлональными антителами к MIF, после чего раствор удаляли и проводили трехкратную промывку. После инкубации с вторичными антителами, меченными пероксидазой хрена (HRP), раствор удаляли и лунки трижды промывали. После добавления субстратного раствора лунки инкубировали в течение 15–25 мин при 37 °C. В завершение в лунки добавляли по 50 мкл стоп-раствора и немедленно проводили измерение оптической плотности при 450 нм. Активность связывания MIF и MHCDG представлена на рисунке 1; данный эффект носил дозозависимый характер.