Active Macrophage Migration Inhibitory Factor (MIF) (APA698Mu01)

Макрофагальный миграционный ингибирующий фактор (MIF), также известный как ингибирующий гликозилирование фактор (GIF), L-допахром-изомераза или фенилпируват-тавтомераза, представляет собой белок, классифицируемый как провоспалительный цитокин. MIF является важным регулятором врожденного иммунитета, участвует в клеточном иммунном ответе, иммунорегуляции и воспалительных процессах. Он регулирует функцию макрофагов в системе защиты организма, подавляя противовоспалительное действие глюкокортикоидов. Данный лимфокин образует комплекс с белком JAB1 в цитозоле вблизи периферической плазматической мембраны, что может указывать на его роль в сигнальных путях интегринов. Кроме того, инвариантная цепь главного комплекса гистосовместимости II класса (MHCDG) была идентифицирована как партнер взаимодействия MIF. В связи с этим был проведен анализ связывания методом ИФА для детекции взаимодействия рекомбинантного мышиного MIF и рекомбинантного мышиного MHCDG. Кратко: MIF серийно разводили в фосфатно-солевом буфере (PBS) с добавлением 0,01% БСА (pH 7,4). Дубликатные пробы объемом 100 мкл вносили в лунки планшета, покрытые MHCDG, и инкубировали в течение 2 ч при 37 °C. Лунки промывали буфером PBST, после чего добавляли поликлональные антитела к MIF и инкубировали 1 ч; затем раствор удаляли и проводили трехкратную промывку. Далее вносили вторичные антитела, меченные пероксидазой хрена (HRP), после чего снова удаляли раствор и трехкратно промывали лунки. После добавления субстратного раствора лунки инкубировали в течение 15–25 мин при 37 °C. В завершение в лунки добавляли по 50 мкл стоп-раствора и немедленно проводили измерение оптической плотности при 450 нм. Результаты, представленные на Рисунке 1, демонстрируют активность связывания MIF с MHCDG, которая носит дозозависимый характер.