Active Mannose Binding Lectin (MBL) (APB480Hu02)

Белок MBL2 (маннозосвязывающий лектин C) представляет собой кальций-зависимый лектин, участвующий в механизмах врожденного иммунитета; он связывается с маннозой, фукозой и N-ацетилглюкозамином на поверхности различных микроорганизмов, что приводит к активации лектинового пути системы комплемента. Доказано, что MASP-2 (серинпротеаза 2, ассоциированная с маннозосвязывающим лектином) образует комплексы с молекулами распознавания паттернов, такими как MBL2, инициируя активацию системы комплемента. В связи с этим был разработан функциональный иммуноферментный анализ (ИФА) для детекции взаимодействия рекомбинантного человеческого белка MBL2 (rhMBL2) с MASP2. Кратко: rhMBL2 последовательно разводили в буфере, содержащем 10 мМ Tris-HCl, 1 М NaCl, 5 мМ CaCl2 и 0,05% Triton X-100 (pH 7,4). Аликвоты объемом 100 мкл вносили в лунки планшета, покрытые MASP2, в двух повторностях и инкубировали в течение 2 ч при 37 °C. После промывки буфером PBST в лунки добавляли моноклональные антитела к MBL2 и инкубировали 1 ч, затем раствор удаляли и проводили трехкратную промывку. Далее вносили вторичные антитела, конъюгированные с пероксидазой хрена (HRP), после чего снова удаляли раствор и трехкратно промывали лунки. После добавления субстратного раствора лунки инкубировали в течение 15–25 мин при 37 °C. Реакцию останавливали добавлением 50 мкл стоп-раствора и немедленно измеряли оптическую плотность при длине волны 450 нм. Активность связывания MBL2 с MASP2 представлена на рисунке 1; наблюдалась дозозависимая реакция.