Active Melanoma Inhibitory Activity Protein 1 (MIA1) (APH650Hu01)

Меланома-ингибирующая активность (MIA), также известная как хондроцит-специфичный ретиноевой кислотой-индуцируемый белок (CD-RAP), представляет собой секретируемый белок массой 12 кДа, продуцируемый хондроцитами и клетками злокачественной меланомы; MIA влияет на рост и адгезию клеток, а также может играть роль в метастазировании меланомы и развитии хрящевой ткани. В присутствии MIA наблюдалось усиление миграционной способности меланоцитарных клеток, индукция генов, ассоциированных с меланомой, а также ингибирование апоптоза, вызванного аноикисом. S100B (кальций-связывающий белок S100B) является лигандом с высоким сродством к MIA1. Для детекции взаимодействия рекомбинантного человеческого MIA1 и рекомбинантного бычьего S100B был проведен функциональный иммуноферментный анализ (ИФА) связывания. Кратко: MIA1 серийно разводили в фосфатно-солевом буфере (PBS) с 0,01% БСА (pH 7,4). Дубликаты проб объемом 100 мкл вносили в лунки планшета, покрытые S100B, и инкубировали в течение 1 ч при 37 °C. Лунки промывали PBST и инкубировали с поликлональными антителами к MIA1 в течение 1 ч, после чего раствор удаляли и проводили трехкратную промывку. Далее лунки инкубировали с вторичными антителами, меченными пероксидазой хрена (HRP), в течение 1 ч при 37 °C, после чего раствор удаляли и проводили пятикратную промывку. После добавления субстратного раствора лунки инкубировали в течение 15–25 мин при 37 °C. В завершение в лунки добавляли по 50 мкл стоп-раствора и немедленно проводили измерение оптической плотности при 450/630 нм. Активность связывания рекомбинантного человеческого MIA1 и рекомбинантного бычьего S100B представлена на рис. 1; значение EC50 для данного эффекта составило 1,1 мкг/мл.