Active Microfibrillar Associated Protein 2 (MFAP2) (APC618Hu01)

Микрофибриллярный ассоциированный белок 2 (MFAP2) представляет собой O-гликозилированный белок, секретируемый во внеклеточное пространство и внеклеточный матрикс. MFAP2 взаимодействует с бигликаном и эластином, образуя тройной комплекс. Данный белок играет ключевую роль в обеспечении поддержки и растяжимости юкстаканаликулярной области коллекторных каналов. Кроме того, MFAP2 способен ингибировать связывание LTB-1 с фибриллином-1, стимулировать фосфорилирование Smad2 и тем самым опосредовать последующее внеклеточное отложение латентного TGF-β. Поскольку фибриллин-1 (FBN1) идентифицирован как партнер взаимодействия MFAP2, для детекции связи между рекомбинантным человеческим MFAP2 и рекомбинантным человеческим FBN1 был проведен иммуноферментный анализ связывания (ELISA). Кратко: MFAP2 серийно разводили в фосфатно-солевом буфере (PBS) с добавлением 0,01% БСА (pH 7,4). Дубликатные пробы объемом 100 мкл вносили в лунки планшета, покрытые FBN1, и инкубировали в течение 2 ч при 37 °C. После промывки лунок буфером PBST проводили инкубацию с поликлональными антителами против MFAP2 в течение 1 ч, после чего раствор удаляли и лунки промывали трижды. Далее следовала инкубация с вторичными антителами, конъюгированными с пероксидазой хрена (HRP), с последующим удалением раствора и трехкратной промывкой. После внесения субстратного раствора лунки инкубировали в течение 15–25 мин при 37 °C. В завершение в лунки добавляли 50 мкл стоп-раствора и немедленно проводили измерение оптической плотности при 450 нм. Активность связывания MFAP2 и FBN1 представлена на рисунке 1; данный эффект носил дозозависимый характер.