Active Motility Related Protein (MRP1) (APB097Hu01)

Белок, ассоциированный с подвижностью (MRP1), относится к суперсемейству АТФ-связывающих кассетных (ABC) транспортеров и обладает активностью АТФаз-сопряженного трансмембранного транспорта неорганических анионов. Он участвует в трансмембранном транспорте анионов, канальцевой секреции в почках и ответе на токсические вещества, являясь интегральным компонентом плазматической мембраны. Поскольку ITGb1 идентифицирован как партнер взаимодействия MRP1, был проведен функциональный связывающий иммуноферментный анализ (ИФА) для детекции взаимодействия рекомбинантного человеческого MRP1 и рекомбинантного человеческого ITGb1. Кратко: биотинилированный MRP1 серийно разводили в фосфатно-солевом буфере (PBS) с 0,01% БСА (pH 7,4). Дубликатные пробы объемом 100 мкл вносили в лунки планшета, покрытые ITGb1, и инкубировали в течение 1 ч при 37 °C. Лунки трижды промывали буфером PBST, после чего проводили инкубацию со стрептавидин-ХРП в течение 30 мин; затем раствор удаляли и лунки промывали 5 раз. После добавления субстратного раствора лунки инкубировали 15–25 мин при 37 °C. В завершение в лунки добавляли по 50 мкл стоп-раствора и немедленно проводили измерение оптической плотности при 450 нм. Активность связывания MRP1 и ITGb1 представлена на рис. 1; значение EC50 для данного эффекта составило 0,049 мкг/мл.