Active Myostatin (MSTN) (APB653Hu61)

Миостатин (MSTN), также известный как фактор дифференцировки роста 8 (GDF-8), является членом семейства белков TGF-бета. Этот секретируемый фактор дифференцировки роста, продуцируемый и высвобождаемый миоцитами, негативно регулирует пролиферацию и дифференцировку клеток скелетных мышц. Поскольку белок 1 костного морфогенеза (BMP1) идентифицирован как партнер взаимодействия MSTN, был проведен связывающий иммуноферментный анализ (ИФА) для детекции взаимодействия рекомбинантного человеческого MSTN и рекомбинантного человеческого BMP1. Кратко: MSTN серийно разводили в фосфатно-солевом буфере (PBS) с добавлением 0,01% бычьего сывороточного альбумина (БСА, pH 7,4). Дубликатные пробы объемом 100 мкл вносили в лунки микротитрационного планшета, покрытые BMP1, и инкубировали в течение 2 ч при 37°C. После промывки буфером PBST лунки инкубировали в течение 1 ч с поликлональными антителами к MSTN, затем раствор удаляли и проводили трехкратную промывку. После инкубации с вторичными антителами, меченными пероксидазой хрена (HRP), раствор удаляли и снова проводили трехкратную промывку. После добавления субстратного раствора лунки инкубировали в течение 15–25 мин при 37°C. В завершение в лунки добавляли по 50 мкл стоп-раствора и немедленно проводили измерение оптической плотности при 450 нм. Активность связывания MSTN с BMP1 представлена на рис. 1; данный эффект носил дозозависимый характер. Рис. Активность связывания MSTN с BMP1.