Active Myostatin (MSTN) (APB653Mu01)

Было проведено исследование связывания рекомбинантного мышиного миостатина (MSTN), также известного как фактор роста и дифференцировки 8 (GDF-8) - секретируемого миокина из семейства белков TGF-β, ингибирующего миогенез, - с рекомбинантным мышиным фоллистатин-подобным белком 3 (FSTL3) методом иммуноферментного анализа (ИФА). Для этого MSTN серийно разводили в фосфатно-солевом буфере (PBS) с добавлением 0,01% бычьего сывороточного альбумина (БСА, pH 7,4). Образцы объемом 100 мкл вносили в лунки планшета, предварительно покрытые FSTL3, и инкубировали в течение 2 ч при 37 °C. После промывки буфером PBST лунки инкубировали в течение 1 ч с поликлональными антителами к MSTN, затем раствор удаляли и проводили трехкратную промывку. Далее вносили вторичные антитела, конъюгированные с пероксидазой хрена (HRP), после чего снова удаляли раствор и трехкратно промывали лунки. Для детекции добавляли субстратный раствор и инкубировали 15–25 мин при 37 °C. Реакцию останавливали добавлением 50 мкл стоп-раствора в каждую лунку и немедленно измеряли оптическую плотность при длине волны 450 нм. Результаты, представленные на рисунке 1, демонстрируют дозозависимое связывание MSTN с FSTL3.