Active Myostatin (MSTN) (APB653Ra01)

Проведен анализ связывания методом ИФА для оценки взаимодействия рекомбинантного миостатина крысы (MSTN) и рекомбинантного фоллистатин-подобного белка 3 крысы (FSTL3). Миостатин (MSTN), также известный как фактор дифференцировки роста 8 (GDF-8), представляет собой миокин - белок, синтезируемый и секретируемый миоцитами, который ингибирует миогенез, включая рост и дифференцировку мышечных клеток. MSTN относится к семейству белков TGF-β. FSTL3 идентифицирован как партнер взаимодействия MSTN. Краткое описание методики: MSTN серийно разводили в фосфатно-солевом буфере (PBS) с добавлением 0,01% БСА (pH 7,4). По 100 мкл каждого разведения в двух повторностях вносили в лунки планшета, предварительно покрытые FSTL3, и инкубировали в течение 2 ч при 37 °C. После промывки буфером PBST лунки инкубировали в течение 1 ч с поликлональными антителами к MSTN, затем раствор удаляли и проводили трехкратную промывку. Далее вносили вторичные антитела, меченные пероксидазой хрена (HRP), после чего снова удаляли раствор и трехкратно промывали лунки. Добавляли субстратный раствор и инкубировали 15–25 мин при 37 °C. Реакцию останавливали добавлением 50 мкл стоп-раствора в каждую лунку и немедленно измеряли оптическую плотность при 450 нм. Результаты, представленные на рисунке 1, демонстрируют дозозависимый характер связывания MSTN с FSTL3.