Active Myxovirus Resistance 1 (MX1) (APL763Hu01)

Белок MX1, индуцируемый интерфероном GTP-связывающий белок Mx1 (кодируется геном MX1 у человека), обладает гомологией с мышиным белком Mx, обеспечивающим специфическое противовирусное состояние против вируса гриппа. Данный цитоплазматический белок относится к семействам динамина и крупных GTPаз. Поскольку тубулин бета (TUBb) идентифицирован как партнер взаимодействия MX1, для детекции связывания рекомбинантного человеческого MX1 с рекомбинантным человеческим TUBb был проведен иммуноферментный анализ (ИФА). Кратко: MX1 серийно разводили в фосфатно-солевом буфере (PBS) с 0,01% БСА (pH 7,4). По 100 мкл дубликатов образца вносили в лунки микропланшета, покрытые TUBb, и инкубировали в течение 2 ч при 37°C. После промывки буфером PBST лунки инкубировали с поликлональными антителами к MX1 в течение 1 ч, затем раствор удаляли и проводили трехкратную промывку. Далее вносили вторичное антитело, меченное пероксидазой хрена (HRP), после чего снова удаляли раствор и трехкратно промывали лунки. Добавляли субстратный раствор и инкубировали 15–25 мин при 37°C. Реакцию останавливали добавлением 50 мкл стоп-раствора и немедленно измеряли оптическую плотность при 450 нм. Результаты, представленные на рисунке 1, демонстрируют дозозависимое связывание MX1 с TUBb.