Active Nerve Growth Factor (NGF) (APA105Hu01)

Фактор роста нервов (NGF) представляет собой нейротрофический фактор и нейропептид, который преимущественно регулирует рост, поддержание жизнеспособности, пролиферацию и выживание определенных типов нейронов. Как сообщается, при воздействии NGF на линию клеток феохромоцитомы PC12 клетки в течение недели прекращают деление и формируют нейриты (Greene and Tischler, 1976). Клетки культивировали в среде Ham's F12K, содержащей 5% эмбриональной телячьей сыворотки и 10% лошадиной сыворотки, на планшетах, покрытых полилизином или коллагеном. При достижении клетками логарифмической фазы роста в свежую среду добавляли NGF в концентрации 10 нг/мл, после чего клетки ежедневно исследовали с помощью инвертированного микроскопа. На рисунке 1 показано прекращение деления и дифференцировка клеток PC12 после 6-дневной инкубации с NGF (10 нг/мл). В контрольной группе, не получавшей NGF, образования нейритов не наблюдалось, а клетки продолжали активно размножаться.

Фактор роста нервов (NGF) является прототипным нейротрофином семейства полипептидов, играющим критическую роль в нейробиологии развития и взрослого организма благодаря своим регуляторным функциям, обеспечивающим выживание, рост и дифференцировку нервных клеток в периферической и центральной нервной системах. Для детекции взаимодействия рекомбинантного человеческого NGF и рекомбинантного человеческого CASP3 был проведен функциональный связывающий иммуноферментный анализ (ИФА). Кратко: NGF серийно разводили в фосфатно-солевом буфере (PBS) с добавлением 0,01% бычьего сывороточного альбумина (БСА, pH 7,4). Дубликаты проб объемом 100 мкл вносили в лунки микропланшета, покрытые CASP3, и инкубировали в течение 1 ч при 37 °C. Лунки промывали буфером PBST и инкубировали с поликлональными антителами к NGF в течение 1 ч, после чего раствор удаляли и проводили трехкратную промывку. Далее лунки инкубировали с вторичными антителами, меченными пероксидазой хрена (HRP), в течение 1 ч при 37 °C, после чего раствор удаляли и проводили пятикратную промывку. После добавления субстратного раствора лунки инкубировали в течение 15–25 мин при 37 °C. В завершение в лунки добавляли по 50 мкл стоп-раствора и немедленно проводили измерение оптической плотности при длинах волн 450/630 нм. Активность связывания рекомбинантного человеческого NGF и рекомбинантного человеческого CASP3 представлена на рис. 1; значение EC50 для данного эффекта составило 0,08 мкг/мл.