Active Nerve Growth Factor (NGF) (APA105Mu01)

Фактор роста нервов (NGF) является прототипным нейротрофином семейства полипептидов, играющим критическую роль в нейробиологии развития и взрослого организма благодаря своим регуляторным функциям, обеспечивающим выживание, рост и дифференцировку нервных клеток в периферической и центральной нервной системах. Каспаза-3 (CASP3) представляет собой рецептор высокого сродства к NGF, в связи с чем был проведен функциональный иммуноферментный анализ (ИФА) связывания для оценки взаимодействия рекомбинантного мышиного NGF и рекомбинантного человеческого CASP3. Кратко: NGF серийно разводили в фосфатно-солевом буфере (PBS) с добавлением 0,01% бычьего сывороточного альбумина (БСА, pH 7,4). Дубликаты проб объемом 100 мкл вносили в лунки микропланшета, покрытые CASP3, и инкубировали в течение 1 ч при 37 °C. Лунки промывали буфером PBST и инкубировали с поликлональными антителами к NGF в течение 1 ч, после чего раствор удаляли и проводили трехкратную промывку. Далее лунки инкубировали с вторичными антителами, меченными пероксидазой хрена (HRP), в течение 1 ч при 37 °C, после чего раствор удаляли и проводили пятикратную промывку. После добавления субстратного раствора лунки инкубировали в течение 15–25 мин при 37 °C. В завершение в лунки добавляли по 50 мкл стоп-раствора и немедленно проводили измерение оптической плотности при длинах волн 450/630 нм. Активность связывания рекомбинантного мышиного NGF и рекомбинантного человеческого CASP3 представлена на рис. 1; значение EC50 для данного эффекта составило 0,86 мкг/мл.