Active Neutrophil Elastase (NE) (APA181Hu01)

Эластаза 2 (ELA2) представляет собой сериновую протеиназу семейства химотрипсинов с широкой субстратной специфичностью. Она секретируется нейтрофилами и макрофагами в ходе воспалительного процесса, участвуя в уничтожении бактерий и деградации тканей хозяина. Нейтрофильная эластаза состоит из 218 аминокислот и содержит две N-гликановые цепи. Данный фермент может играть роль в развитии дегенеративных и воспалительных заболеваний за счет протеолиза коллагена IV типа и эластина внеклеточного матрикса. Кроме того, он способен деградировать белок наружной мембраны A (OmpA) Escherichia coli, а также факторы вирулентности таких бактерий, как Shigella, Salmonella и Yersinia. Поскольку коллаген XVII типа (COL17) был идентифицирован как партнер по взаимодействию с ELA2, для детекции связи между рекомбинантным человеческим COL17 и рекомбинантной человеческой ELA2 был проведен иммуноферментный анализ (ИФА). Кратко: ELA2 последовательно разводили в фосфатно-солевом буфере (PBS) с добавлением 0,01% БСА (pH 7,4). Дубликатные пробы объемом 100 мкл вносили в лунки планшета, покрытые COL17, и инкубировали в течение 2 ч при 37 °C. После промывки буфером PBST лунки инкубировали в течение 1 ч с поликлональными антителами к ELA2, затем раствор удаляли и проводили трехкратную промывку. Далее вносили вторичные антитела, конъюгированные с пероксидазой хрена (HRP), после чего снова удаляли раствор и трехкратно промывали лунки. После добавления субстратного раствора лунки инкубировали в течение 15–25 мин при 37 °C. В завершение в лунки добавляли по 50 мкл стоп-раствора и немедленно измеряли оптическую плотность при 450 нм. Результаты, представленные на рисунке 1, демонстрируют связывание ELA2 с COL17, которое носит дозозависимый характер.