Active Neutrophil Elastase (NE) (APA181Mu61)

Нейтрофильная эластаза (NE), также известная как эластаза полиморфноядерных лейкоцитов, представляет собой основную протеазу первичных гранул нейтрофилов, участвующую в микробицидной активности. Она локализуется преимущественно в азурофильных гранулах полиморфноядерных лейкоцитов. NE является важным фактором, стимулирующим воспаление, обладает бактерицидным действием и сокращает длительность воспалительного процесса. Кроме того, NE регулирует рост опухоли, способствуя метастазированию и ремоделированию микроокружения опухоли; однако в определенных условиях она может проявлять противоопухолевую активность, а также участвовать в развитии других заболеваний, таких как нарушение легочной вентиляции. Лактоферрин (LTF) идентифицирован как партнер взаимодействия для NE, в связи с чем был проведен функциональный ИФА связывания для детекции взаимодействия рекомбинантной мышиной NE и рекомбинантного козьего LTF. Кратко: биотинилированную NE серийно разводили в фосфатно-солевом буфере (PBS) с добавлением 0,01% бычьего сывороточного альбумина (БСА, pH 7,4). Дубликаты проб объемом 100 мкл переносили в лунки микротитровального планшета, покрытые LTF, и инкубировали в течение 1 ч при 37 °C. Лунки трижды промывали буфером PBST, после чего добавляли стрептавидин-пероксидазу хрена (HRP) и инкубировали 30 мин. Затем раствор удаляли, а лунки промывали пять раз. После добавления субстратного раствора лунки инкубировали 15–25 мин при 37 °C. В завершение в лунки добавляли по 50 мкл стоп-раствора и немедленно проводили измерение оптической плотности при 450 нм. Активность связывания NE и LTF представлена на рисунке 1; значение EC50 для данного эффекта составило 0,084 мкг/мл.