Active Neutrophil gelatinase-associated lipocalin (NGAL) (APB388Mu01)

Липокалин-2, также известный как липокалин, ассоциированный с желатиназой нейтрофилов (NGAL), изначально был идентифицирован как компонент гранул нейтрофилов. Это белок с молекулярной массой 25 кДа, существующий в мономерной, гомо- и гетеродимерной формах, причем последняя представляет собой димер с желатиназами нейтрофилов человека (MMP-9). Его экспрессия наблюдается в большинстве тканей, обычно контактирующих с микроорганизмами, а синтез индуцируется в эпителиальных клетках при воспалении. Липокалин-2 вовлечен в различные процессы, включая дифференцировку клеток, опухолеобразование и апоптоз. Исследования показывают, что липокалин-2 связывает бактериальный катехолатный сидерофор, комплексированный с ионом железа (III), такой как энтеробактин, с субнаномолярной константой диссоциации (Kd = 0,41 нМ). Связанный комплекс ферри-энтеробактина медленно разрушается в течение месяца до дигидроксибензоилсерина и дигидроксибензойной кислоты (DHBA). Он также связывается с комплексом ферри-DHBA со значительно меньшими значениями Kd (7,9 нМ). Активность рекомбинантного мышиного NGAL оценивали по его способности связывать дигидроксибензойную кислоту железа (III) Fe(DHBA)3. Связывание Fe(DHBA)3 приводит к тушению флуоресценции триптофана в липокалине-2. Рекомбинантный мышиный NGAL разводили до концентрации 100 мкг/мл в буфере для анализа (50 мМ Tris, 10 мМ CaCl2, 150 мМ NaCl, pH 7,5). В планшет вносили по 50 мкл Fe(DHBA)3 различных концентраций и по 50 мкл раствора rmNGAL концентрацией 100 мкг/мл. Инкубировали при комнатной температуре в течение 30 минут, после чего проводили измерения в конечной точке при длинах волн возбуждения и испускания 280 нм и 340 нм соответственно. Результаты представлены на рисунке 1: рекомбинантный мышиный липокалин-2 способен связывать более 1 мкМ Fe(DHBA)3.