Active Noggin (NOG) (APC130Hu01)

Белок ноггин (NOG), участвующий в развитии нервных, мышечных и костных тканей и регуляции BMP4, взаимодействует с фактором дифференцировки роста 5 (GDF5/CDF5). Для детекции взаимодействия рекомбинантного человеческого NOG и рекомбинантного человеческого CDF5 проводили иммуноферментный анализ связывания. NOG серийно разводили в фосфатно-солевом буфере (PBS) с 0,01% БСА (pH 7,4). Образцы объемом 100 мкл в двух повторностях вносили в лунки планшета, покрытые CDF5, и инкубировали в течение 2 ч при 37°C. После промывки буфером PBST лунки инкубировали с поликлональными антителами к NOG в течение 1 ч, затем асперировали и промывали трижды. Далее проводили инкубацию с вторичными антителами, меченными пероксидазой хрена (HRP), с последующей аспирацией и трехкратной промывкой. После добавления субстратного раствора лунки инкубировали 15–25 мин при 37°C. Реакцию останавливали добавлением 50 мкл стоп-раствора и немедленно измеряли оптическую плотность при 450 нм. Результаты (рис. 1) демонстрируют дозозависимое связывание NOG с CDF5.