Active Noggin (NOG) (APC130Ra02)

Ноггин (NOG) представляет собой сигнальную молекулу, играющую ключевую роль в формировании сомитов у развивающегося эмбриона, что необходимо для морфогенеза хряща и образования суставов. Являясь ингибитором сигнального пути костных морфогенетических белков (BMP) за счет связывания с BMP4, был проведен связывающий иммуноферментный анализ (ИФА) для детекции взаимодействия рекомбинантного крысиного NOG с BMP4. Кратко: раствор NOG подвергали серийным разведениям в фосфатно-солевом буфере (PBS), содержащем 0,01% бычьего сывороточного альбумина (БСА), pH 7,4. Дубликатные пробы объемом 100 мкл вносили в лунки планшета, покрытые BMP4, и инкубировали в течение 2 ч при 37°C. После промывки лунок буфером PBST проводили инкубацию с поликлональными антителами к NOG в течение 1 ч, затем раствор удаляли и лунки промывали трижды. Далее следовала инкубация с вторичными антителами, конъюгированными с пероксидазой хрена (HRP), после чего лунки снова аспирировали и трехкратно промывали. После добавления субстратного раствора лунки инкубировали в течение 15–25 мин при 37°C. В завершение в лунки добавляли 50 мкл стоп-раствора и немедленно проводили измерение оптической плотности при длине волны 450 нм. Активность связывания NOG с BMP4 представлена на рисунке 1; данный эффект носил дозозависимый характер.