Active Parathyroid Hormone Related Protein (PTHrP) (APA819Mu01)

PTHrP (паратиреоидный гормон-родственный белок) представляет собой нейроэндокринный пептид, являющийся ключевым регулятором роста, развития, миграции, дифференцировки и выживаемости клеток и органов, а также транспорта ионов кальция в эпителии. Он регулирует эндохондральное костеобразование и эпителиально-мезенхимальные взаимодействия в процессе формирования молочных желез и зубов. Для детекции ассоциации PTHrP с PTHR1 был проведен связывающий иммуноферментный анализ (ИФА). Кратко: PTHrP последовательно разводили в фосфатно-солевом буфере (PBS) с добавлением 0,01% бычьего сывороточного альбумина (БСА), pH 7,4. Дубликатные пробы PTHrP объемом 100 мкл вносили в лунки планшета, покрытые PTHR1, и инкубировали в течение 2 ч при 37 °C. После промывки лунок буфером PBST их инкубировали в течение 1 ч с поликлональными антителами к PTHrP, затем содержимое удаляли и проводили трехкратную промывку. Далее следовала инкубация с вторичными антителами, меченными пероксидазой хрена (HRP), после чего лунки снова опорожняли и трехкратно промывали. После внесения субстратного раствора лунки инкубировали в течение 15–25 мин при 37 °C. В завершение в лунки добавляли 50 мкл стоп-раствора и немедленно проводили измерение оптической плотности при длине волны 450 нм. Активность связывания PTHrP с PTHR1 представлена на рисунке 1; данный эффект носил дозозависимый характер.

Вестерн-блоттинг; образец: рекомбинантный PTHrP мыши.