Active Phospholipase A2 Group VII (LpPLA2) (APA867Ra61)

PLA2G-VII, также известная как Lp-PLA2, представляет собой плазменный фермент, связанный с липопротеинами: 80% связано с ЛПНП, 15–20% - с ЛПВП, остальная часть - с ЛПОНП. Фермент преимущественно продуцируется зрелыми макрофагами и активированными тромбоцитами. В отличие от других классических секреторных фосфолипаз A2 (sPLA2), PLA2G-VII обладает низкой специфичностью к длинноцепочечным жирным кислотам в положении Sn-2, за исключением случаев их сильного окисления, и катализирует реакцию субстратов в водной фазе, а не на межфазной поверхности липидов. Следовательно, фермент проявляет высокую специфичность к водорастворимым фосфолипидам плазмы, включая окислительно-модифицированные фосфолипиды и фактор активации тромбоцитов (PAF). Благодаря этой активности фермент также известен как PAF-ацетилгидролаза (PAF-AH). Дефицит человеческой PLA2G-VII связан с повышенным риском инсульта и сердечно-сосудистых заболеваний. Активность рекомбинантной крысиной PLA2G-VII оценивали по способности расщеплять хромогенный пептидный субстрат 1-O-гексадецил-2-дезокси-2-тио-S-ацетил-sn-глицерил-3-фосфорилхолин (2-Thio-PAF). Реакцию проводили в буфере для анализа (50 мМ MES, 150 мМ NaCl, 0,1 мг/мл БСА, pH 6,5), инициируя добавлением 50 мкл различных концентраций PLA2G-VII (разведенных в буфере для анализа) к смеси из 50 мкл 0,2 мМ субстрата и 0,2 мМ DTNB. В качестве отрицательного контроля использовали лунку без PLA2G-VII, куда добавляли 50 мкл буфера для анализа. Затем в кинетическом режиме в течение 5 минут измеряли оптическую плотность при длине волны 405 нм. Удельная активность рекомбинантной крысиной PLA2G-VII составила 112,37 пмоль/мин/мкг.