Active Plasminogen Activator Inhibitor 1 (PAI1) (APA532Hu61)

Плазминогенный активатор ингибитор 1 (PAI1), относящийся к суперсемейству серпинов (Serpin E1), является основным ингибитором урокиназного (uPA) и тканевого типов активаторов плазминогена. Будучи ключевыми регуляторами ремоделирования внеклеточного матрикса, uPA и PAI1 играют важную роль в таких процессах, как ангиогенез, инвазия опухоли и ожирение. Поскольку витронектин (VTN) идентифицирован как партнер взаимодействия PAI1, был проведен связывающий иммуноферментный анализ (ИФА) для детекции взаимодействия рекомбинантного человеческого PAI1 и рекомбинантного человеческого VTN. Кратко: PAI1 серийно разводили в фосфатно-солевом буфере (PBS) с добавлением 0,01% бычьего сывороточного альбумина (БСА, pH 7,4). Дубликатные пробы объемом 100 мкл вносили в лунки микропланшета, покрытые VTN, и инкубировали в течение 2 ч при 37°C. Лунки промывали буфером PBST и инкубировали в течение 1 ч с поликлональными антителами к PAI1, после чего раствор удаляли и проводили трехкратную промывку. После инкубации с вторичными антителами, меченными пероксидазой хрена (HRP), раствор удаляли и лунки промывали три раза. Затем добавляли субстратный раствор и инкубировали лунки в течение 15–25 мин при 37°C. В завершение в лунки добавляли по 50 мкл стоп-раствора и немедленно проводили измерение оптической плотности при длине волны 450 нм. Активность связывания PAI1 и VTN представлена на рисунке 1; эффект носил дозозависимый характер, значение EC50 составило приблизительно 4,47 мкг/мл.