Active Plasminogen Activator, Urokinase Receptor (uPAR) (APA141Ra01)

Рецептор активатора плазминогена урокиназного типа (uPAR) является рецептором для активатора плазминогена урокиназного типа (uPA) и, учитывая его роль в локализации и стимулировании образования плазмина, вероятно, влияет на множество нормальных и патологических процессов, связанных с активацией плазминогена на поверхности клетки и локализованной деградацией внеклеточного матрикса. Рецептор урокиназы (uPAR) был идентифицирован как мембранный рецептор сериновой протеазы урокиназы (uPA), что обусловливает его вовлеченность в каскад активации плазминогена и регуляцию периклеточного протеолиза; в связи с этим был проведен связывающий иммуноферментный анализ (ИФА) для детекции взаимодействия рекомбинантного uPAR крысы и рекомбинантного uPA человека. Кратко: биотинилированный uPAR серийно разводили в фосфатно-солевом буфере (PBS) с добавлением 0,01% бычьего сывороточного альбумина (БСА, pH 7,4). Дубликаты проб объемом 100 мкл переносили в лунки микротитровального планшета, покрытые uPA, и инкубировали в течение 1 ч при 37 °C. Лунки трижды промывали буфером PBST, после чего проводили инкубацию со стрептавидином, конъюгированным с пероксидазой хрена (HRP), в течение 30 мин; затем раствор удаляли отсасыванием, а лунки промывали пять раз. После добавления субстратного раствора лунки инкубировали в течение 15–25 мин при 37 °C. В завершение в лунки добавляли по 50 мкл стоп-раствора и немедленно проводили измерение оптической плотности при 450 нм. Активность связывания uPAR и uPA представлена на рисунке 1; значение EC50 для данного эффекта составило 0,223 мкг/мл.