Active Plasminogen Activator, Urokinase (uPA) (APA140Mu61)

Урокиназный активатор плазминона (uPA), также известный как урокиназа, представляет собой высокоспецифичную сериновую протеазу из семейства пептидаз S1, которая расщепляет плазминоген с образованием плазмина, являясь ключевым компонентом системы активаторов плазминогена (PA). Экспрессия uPA минимальна в нормальных клетках, но многократно повышается в опухолевых клетках под действием внеклеточных стимулов, характерных для рака, что коррелирует с неблагоприятным прогнозом при нескольких типах онкологических заболеваний. В связи с этим uPA признан перспективной мишенью для разработки терапевтических препаратов посредством ингибирования его протеазной активности или сигнальных путей, зависимых от uPA, находящегося в комплексе с рецептором uPAR (uPAR). Активность uPA оценивали по способности расщеплять пептидный субстрат N-карбобензилокси-Гли-Гли-Арг-7-амидо-4-метилкумарин (Z-GGR-AMC). Реакцию проводили в буфере для анализа (50 мМ Трис, 0,01% Твин-20, pH 8,5), инициируя добавлением 50 мкл раствора uPA в концентрации 1,5 мкг/мл (разведенного в буфере для анализа) к 50 мкл субстрата в концентрации 200 мкМ. Регистрацию сигналов осуществляли в кинетическом режиме в течение 5 минут при длинах волн возбуждения 380 нм и испускания 460 нм (считывание сверху). Удельная активность рекомбинантного мышиного uPA составляет >2000 пмоль/мин/мкг.