Active Plasminogen (Plg) (APB236Ra01)

Плазминоген (Plg) может быть активирован в плазмин под действием тканевого активатора плазминогена (tPA), урокиназного активатора плазминогена (uPA), калликреина и фактора XII (фактор Хагемана). Плазмин способен растворять фибриновые тромбы, а также участвовать в таких процессах, как эмбриональное развитие, ремоделирование тканей, воспаление и инвазия опухолей. Кроме того, плазмин активирует коллагеназы, ослабляет стенки граафова пузырька и расщепляет фибрин, фибронектин, тромбоспондин, ламинин и фактор фон Виллебранда. Поскольку бета-актин (ACTb) был идентифицирован как белок-партнер плазминогена, для детекции их взаимодействия был проведен иммуноферментный анализ связывания с использованием рекомбинантного крысиного плазминогена и рекомбинантного крысиного ACTb. Кратко: плазминоген серийно разводили в фосфатно-солевом буфере (PBS) с добавлением 0,01% БСА (pH 7,4). Дубликатные пробы объемом 100 мкл вносили в лунки планшета, покрытые ACTb, и инкубировали в течение 2 ч при 37 °C. После промывки буфером PBST лунки инкубировали в течение 1 ч с поликлональными антителами к плазминогену, затем содержимое удаляли и проводили трехкратную промывку. Далее следовала инкубация с вторичными антителами, меченными пероксидазой хрена (HRP), после чего снова проводили удаление содержимого и трехкратную промывку. После внесения субстратного раствора лунки инкубировали в течение 15–25 мин при 37 °C. В завершение в лунки добавляли 50 мкл стоп-раствора и немедленно измеряли оптическую плотность при 450 нм. Активность связывания плазминогена и ACTb представлена на рисунке 1; наблюдалась дозозависимая реакция.