Active Platelet/Endothelial Cell Adhesion Molecule (PECAM1) (APA363Hu61)

PECAM-1 (молекула адгезии тромбоцитов и эндотелиальных клеток-1, также известная как CD31) представляет собой трансмембранный гликопротеин адгезии I типа массой 130 кДа из семейства иммуноглобулинов. Экспрессия ограничена клетками, участвующими в циркуляции, в частности эндотелиальными клетками, тромбоцитами, моноцитами, нейтрофилами и субпопуляциями лимфоцитов. PECAM-1 концентрируется в межклеточных контактах и необходим для трансэндотелиальной миграции (ТЭМ). Кроме того, кадгерин 5 (CDH5) идентифицирован как партнер взаимодействия PECAM-1, в связи с чем был проведен связывающий ИФА для детекции взаимодействия рекомбинантного человеческого PECAM-1 и рекомбинантного человеческого CDH5. Кратко: PECAM-1 последовательно разводили в фосфатно-солевом буфере (PBS) с 0,01% БСА (pH 7,4). Дубликатные пробы объемом 100 мкл вносили в лунки микропланшета, покрытые CDH5, и инкубировали в течение 1 ч при 37 °C. Лунки промывали буфером PBST и инкубировали в течение 1 ч с поликлональными антителами к PECAM-1, после чего раствор удаляли и проводили трехкратную промывку. После инкубации с вторичными антителами, меченными пероксидазой хрена (HRP), в течение 1 ч при 37 °C, раствор удаляли и проводили пятикратную промывку. После добавления субстратного раствора лунки инкубировали в течение 15–25 мин при 37 °C. Наконец, в лунки добавляли 50 мкл стоп-раствора и немедленно проводили измерение оптической плотности при 450/630 нм. Активность связывания PECAM-1 и CDH5 представлена на рис. 1; значение ED50 для данного эффекта составило 126,6 нг/мл.