Active Platelet Factor 4 (PF4) (APA172Mu01)

Фактор тромбоцитов 4 (PF4), также известный как хемокин (C-X-C мотив) лиганд 4 (CXCL4), представляет собой небольшой цитокин семейства CXC-хемокинов, который высвобождается из альфа-гранул активированных тромбоцитов в процессе агрегации и способствует свертыванию крови за счет модуляции эффектов гепариноподобных молекул; в связи с этим предполагается его участие в репарации ран и воспалительных процессах. Для оценки способности рекомбинантного человеческого PF4 ингибировать пролиферацию клеток эндотелия пупочной вены человека (HUVEC), зависимую от основного фактора роста фибробластов (FGF basic), клетки HUVEC высевали в 96-луночные планшеты в количестве 3000 клеток на лунку в стандартной среде DMEM с добавлением 2% сыворотки, содержащей 1 мкг/мл рекомбинантного человеческого FGF1 и различные концентрации рекомбинантного человеческого PF4. После 48 часов инкубации клетки исследовали с помощью инвертированного микроскопа, а пролиферацию клеток оценивали с использованием набора Cell Counting Kit-8 (CCK-8): в каждую лунку добавляли по 10 мкл раствора CCK-8, затем после дополнительной инкубации планшета в течение 1–2 часов при 37°C измеряли оптическую плотность при длине волны 450 нм на микропланшетном ридере. Результаты микроскопического анализа пролиферации клеток HUVEC после 48-часовой инкубации с PF4 представлены на рисунке 1. Жизнеспособность клеток оценивали методом CCK-8 после 48-часовой инкубации с рекомбинантным человеческим PF4; результаты показаны на рисунке 2. Было установлено, что PF4 достоверно ингибирует пролиферацию клеток HUVEC, зависимую от основного FGF. Значение ED50 составило 3,4 мкг/мл. (A) Клетки HUVEC, культивированные в среде DMEM с добавлением 1 мкг/мл FGF1 и стимулированные 5 мкг/мл PF4 в течение 48 ч; (B) Нестимулированные клетки HUVEC, культивированные в среде DMEM с добавлением 1 мкг/мл FGF1 в течение 48 ч. Ингибирование пролиферации клеток HUVEC после стимуляции PF4.

Ингибирование пролиферации клеток HUVEC, зависимой от основного фактора роста фибробластов (FGF), после стимуляции тромбоцитарным фактором 4 (PF4).

Проведен вестерн-блоттинг с использованием рекомбинантного белка PF4 мыши и кроличьих антител к PF4 мыши (PAA172Mu01).