Active Pleiotrophin (PTN) (APB309Hu01)

Плейотрофин (PTN) представляет собой секретируемый гепарин-связывающий цитокин, состоящий из 136 аминокислот, который регулирует разнообразные процессы, включая дифференцировку глиальных клеток-предшественников, рост нейритов и ангиогенез. Установлено, что PTN связывается с рядом рецепторов, в том числе с синдеканом-1 (SDC1). Для детекции взаимодействия рекомбинантного человеческого PTN и рекомбинантного человеческого SDC1 был проведен функциональный иммуноферментный анализ (ИФА) связывания. Кратко: PTN серийно разводили в фосфатно-солевом буфере (PBS) с добавлением 0,01% бычьего сывороточного альбумина (БСА, pH 7,4). Дубликаты проб объемом 100 мкл вносили в лунки планшета, покрытые SDC1 (2 мкг/мл, 100 мкл/лунку), и инкубировали в течение 1 ч при 37 °C. После промывки буфером PBST лунки инкубировали с поликлональными антителами к PTN в течение 1 ч, затем раствор удаляли и проводили трехкратную промывку. Далее добавляли вторичные антитела, меченные пероксидазой хрена (HRP), после чего раствор удаляли и выполняли пятикратную промывку. После внесения субстратного раствора лунки инкубировали в течение 15–25 мин при 37 °C. В завершение добавляли 50 мкл стоп-раствора и немедленно проводили измерение оптической плотности при 450 нм. Активность связывания рекомбинантного человеческого PTN с рекомбинантным человеческим SDC1 представлена на рис. 1; значение EC50 составило 3,47 мкг/мл.