Active Pregnancy Associated Plasma Protein A (PAPPA) (APA800Hu01)

Беременность-ассоциированный белок А (PAPPA), также известный как паппализин-1, представляет собой секретируемую протеазу, основным субстратом которой являются белки, связывающие инсулиноподобный фактор роста. Протеолитическая активность PAPPA активируется при связывании с коллагеном; предполагается, что белок участвует в локальных пролиферативных процессах, таких как заживление ран и ремоделирование костной ткани. Низкий уровень данного белка в плазме рассматривается как биохимический маркер беременности плодом с анеуплоидией (аномальным числом хромосом). Кроме того, было идентифицировано взаимодействие PAPPA с плазминогеном (Plg), в связи с чем для детекции взаимодействия рекомбинантного человеческого PAPPA и рекомбинантного человеческого Plg был проведен иммуноферментный анализ (ИФА) на связывание. Кратко: PAPPA серийно разводили в фосфатно-солевом буфере (PBS) с добавлением 0,01% бычьего сывороточного альбумина (БСА, pH 7,4). Дубликаты проб объемом 100 мкл вносили в лунки микропланшета, покрытые Plg, и инкубировали в течение 2 ч при 37 °C. Лунки промывали буфером PBST и инкубировали в течение 1 ч с поликлональными антителами к PAPPA, после чего раствор удаляли и проводили трехкратную промывку. После инкубации с вторичными антителами, меченными пероксидазой хрена (HRP), раствор удаляли и лунки промывали три раза. После добавления субстратного раствора лунки инкубировали в течение 15–25 мин при 37 °C. В завершение в лунки добавляли по 50 мкл стоп-раствора и немедленно проводили измерение оптической плотности при 450 нм. Активность связывания PAPPA и Plg представлена на рис. 1; данный эффект носил дозозависимый характер.