Active Pregnancy Associated Plasma Protein A (PAPPA) (APA800Hu04)

Белок PAPPA (паппализин-1), являющийся секретируемой протеазой, субстратом которой служат белки, связывающие инсулиноподобный фактор роста, активируется при связывании с коллагеном и участвует в локальных пролиферативных процессах, таких как заживление ран и ремоделирование костной ткани; низкий уровень данного белка в плазме рассматривается как биохимический маркер анеуплоидии плода. Поскольку плазминоген (Plg) идентифицирован как партнер взаимодействия PAPPA, был проведен связывающий ИФА для детекции взаимодействия рекомбинантного человеческого PAPPA и рекомбинантного человеческого Plg. Кратко: биотинилированный PAPPA серийно разводили в фосфатно-солевом буфере (PBS) с 0,01% БСА (pH 7,4). Дубликатные пробы объемом 100 мкл вносили в лунки планшета, покрытые Plg, и инкубировали в течение 1 ч при 37°C. Лунки промывали 3 раза буфером PBST и инкубировали 0,5 ч при 37°C со стрептавидином, конъюгированным с пероксидазой хрена (HRP). После инкубации содержимое лунок удаляли аспирацией и промывали 5 раз. Добавляли субстратный раствор и инкубировали 15–25 мин при 37°C. В завершение в лунки добавляли 50 мкл стоп-раствора и немедленно проводили измерение оптической плотности при 450/630 нм. Активность связывания PAPPA и Plg представлена на рисунке 1; значение ED50 для данного эффекта составило 0,04936 мкг/мл.