Active Procollagen II N-Terminal Propeptide (PIINP) (APA257Hu61)

N-терминальный пропептид проколлагена II (PIINP) специфичен для хрящевых тканей и играет ключевую роль в нормальном эмбриональном развитии скелета, линейном росте и устойчивости хряща к компрессионным нагрузкам; нарушения в его структуре ассоциированы с ахондрогенезом, хондродисплазией, семейным остеоартритом с ранним началом, ахондрогенезом Лангера-Сальдино, врожденной спондилоэпифизарной дисплазией (SED), дисплазией Книста, синдромом Стиклера I типа и спондилоэпиметафизарной дисплазией Страдвика. Для выявления взаимодействия PIINP с ITGb1 проводили связывающий иммуноферментный анализ (ИФА). Кратко: ITGb1 серийно разводили в фосфатно-солевом буфере (PBS) с добавлением 0,01% бычьего сывороточного альбумина (БСА, pH 7,4). Дубликатные пробы ITGb1 объемом 100 мкл вносили в лунки микропланшета, покрытые PIINP (2 мкг/мл, 100 мкл/лунку), и инкубировали в течение 1 ч при 37 °C. После промывки буфером PBST лунки инкубировали в течение 1 ч с поликлональными антителами к ITGb1, затем раствор удаляли и проводили трехкратную промывку. Далее проводили инкубацию с вторичными антителами, меченными пероксидазой хрена (HRP), после чего раствор удаляли и выполняли пятикратную промывку. После добавления субстратного раствора лунки инкубировали в течение 15–25 мин при 37 °C. В завершение в лунки добавляли по 50 мкл стоп-раствора и немедленно проводили измерение оптической плотности при 450 нм. Результаты связывания PIINP с ITGb1 представлены на рис. 1; взаимодействие носило дозозависимый характер, значение EC50 составило приблизительно 2,82 мкг/мл.