Active Puromycin Sensitive Aminopeptidase (PSA) (APE206Hu01)

Пурамицин-чувствительная аминопептидаза (PSA), также известная как цитозольная аланинаминопептидаза или аланинаминопептидаза (AAP), используется в качестве биомаркера для выявления повреждения почек и диагностики определенных почечных заболеваний; ее уровень в моче повышается при патологиях почек. Предполагается, что PSA участвует в различных процессах, включая метаболизм нейропептидаз, регуляцию клеточного цикла и гидролиз протеасомных продуктов до аминокислот. Кроме того, белок дисульфидизомераза A3 (PDIA3) идентифицирован как партнер взаимодействия PSA, в связи с чем был проведен связывающий ИФА для детекции взаимодействия рекомбинантного человеческого PSA и рекомбинантного человеческого PDIA3. Кратко: PSA серийно разводили в фосфатно-солевом буфере (PBS) с добавлением 0,01% бычьего сывороточного альбумина (БСА, pH 7,4). Дубликаты проб объемом 100 мкл вносили в лунки планшета, покрытые PDIA3, и инкубировали в течение 2 ч при 37°C. Лунки промывали PBS с Tween 20 (PBST) и инкубировали в течение 1 ч с поликлональными антителами к PSA, после чего раствор удаляли и проводили трехкратную промывку. После инкубации с вторичными антителами, меченными пероксидазой хрена (HRP), раствор удаляли и лунки трижды промывали. После добавления субстратного раствора лунки инкубировали в течение 15–25 мин при 37°C. В завершение в лунки добавляли по 50 мкл стоп-раствора и немедленно проводили измерение оптической плотности при 450 нм. Связывающая активность PSA и PDIA3 представлена на рисунке 1; эффект носил дозозависимый характер. Связывающая активность PSA с PDIA3.