Active S100 Calcium Binding Protein B (S100B) (APA567Hu01)

Белок S100B, являющийся представителем семейства кальций-связывающих белков с EF-руками и участвующий в регуляции клеточного цикла и дифференцировки, взаимодействует с рецептором конечных продуктов гликирования (RAGE), опосредующим передачу сигнала. Для оценки взаимодействия рекомбинантного человеческого белка S100B и рекомбинантного человеческого белка RAGE был проведен иммуноферментный анализ (ИФА) связывания. Кратко: S100B серийно разводили в фосфатно-солевом буфере (PBS) с 0,01% БСА (pH 7,4). Дубликаты проб объемом 100 мкл вносили в лунки планшета, покрытые белком RAGE, и инкубировали в течение 2 ч при 37°C. После промывки буфером PBST лунки инкубировали в течение 1 ч с моноклональными антителами к S100B, затем раствор удаляли и проводили трехкратную промывку. Далее добавляли вторичные антитела, меченные пероксидазой хрена (HRP), после чего снова удаляли раствор и трехкратно промывали лунки. После внесения субстратного раствора лунки инкубировали 15–25 мин при 37°C. Реакцию останавливали добавлением 50 мкл стоп-раствора и немедленно измеряли оптическую плотность при 450 нм. Результаты, представленные на рисунке 1, демонстрируют дозозависимое связывание S100B с RAGE.