Active S100 Calcium Binding Protein B (S100B) (APA567Mu01)

Белок S100B относится к семейству S100 - кальций-связывающих белков с EF-руками, участвующих в регуляции ряда клеточных процессов, таких как прогрессия клеточного цикла и дифференцировка. Экспериментальные данные свидетельствуют о том, что рецептор конечных продуктов гликирования (RAGE) играет важную роль в опосредовании клеточной сигнализации, индуцированной белками S100. Кроме того, аминокислотная последовательность мышиного RAGE гомологична человеческому RAGE с идентичностью 78,2%. В связи с этим был проведен связывающий иммуноферментный анализ (ИФА) для детекции взаимодействия между рекомбинантным мышиным белком S100B и рекомбинантным человеческим белком RAGE. Кратко: раствор S100B серийно разводили в фосфатно-солевом буфере (PBS), содержащем 0,01% бычьего сывороточного альбумина (БСА), pH 7,4. По 100 мкл каждого разведения в двух повторностях вносили в лунки планшета, покрытые белком RAGE, и инкубировали в течение 2 ч при 37°C. После промывки лунок буфером PBST добавляли моноклональные антитела к S100B и инкубировали 1 ч, затем содержимое удаляли и проводили трехкратную промывку. Далее вносили вторичные антитела, конъюгированные с пероксидазой хрена (HRP), после чего снова удаляли раствор и трехкратно промывали лунки. Добавляли субстратный раствор и инкубировали 15–25 мин при 37°C. Реакцию останавливали добавлением 50 мкл стоп-раствора в каждую лунку и немедленно измеряли оптическую плотность при длине волны 450 нм. Активность связывания между S100B и RAGE представлена на рисунке 1; наблюдалась дозозависимая динамика данного эффекта.