Active S100 Calcium Binding Protein B (S100B) (APA567Ra01)

Белок S100B относится к семейству S100 - кальций-связывающих белков с EF-рукой, участвующих в регуляции ряда клеточных процессов, таких как прогрессия клеточного цикла и дифференцировка. Экспериментальные данные свидетельствуют о том, что рецептор конечных продуктов гликирования (RAGE) играет важную роль в опосредовании клеточной сигнализации, индуцированной белками S100. Кроме того, аминокислотная последовательность крысиного RAGE имеет 80,0% идентичности с человеческим RAGE. В связи с этим был проведен связывающий иммуноферментный анализ (ИФА) для детекции взаимодействия между рекомбинантным крысиным белком S100B и рекомбинантным человеческим белком RAGE. Кратко: S100B серийно разводили в фосфатно-солевом буфере (PBS) с добавлением 0,01% бычьего сывороточного альбумина (БСА), pH 7,4. Дубликатные пробы объемом 100 мкл вносили в лунки планшета, покрытые белком RAGE, и инкубировали в течение 2 ч при 37°C. Лунки промывали буфером PBST и инкубировали в течение 1 ч с моноклональными антителами к S100B, после чего содержимое удаляли и проводили трехкратную промывку. Затем добавляли вторичные антитела, меченные пероксидазой хрена (HRP), снова удаляли содержимое и трехкратно промывали лунки. После внесения субстратного раствора лунки инкубировали в течение 15–25 мин при 37°C. В завершение в лунки добавляли по 50 мкл стоп-раствора и немедленно измеряли оптическую плотность при длине волны 450 нм. Активность связывания S100B и RAGE представлена на рисунке 1; данный эффект носил дозозависимый характер.