Active Semaphorin 3A (SEMA3A) (APL917Hu01)

Белок семафорин 3A (SEMA3A), являющийся членом семейства семафоринов, секретируется нейронами и окружающими тканями для направления миграции клеток и аксонов в развивающейся нервной системе; он может функционировать как хеморепеллент, ингибирующий рост аксонов, или как хемоаттрактант, стимулирующий рост апикальных дендритов, что критически важно для нормального развития нейрональных паттернов. Поскольку нейронилин-1 (NRP1) идентифицирован как партнер взаимодействия SEMA3A, был проведен иммуноферментный анализ (ИФА) для оценки связывания рекомбинантного человеческого SEMA3A с рекомбинантным человеческим NRP1. Кратко: SEMA3A серийно разводили в фосфатно-солевом буфере (PBS) с добавлением 0,01% бычьего сывороточного альбумина (БСА, pH 7,4). Дубликаты проб объемом 100 мкл вносили в лунки планшета, покрытые NRP1, и инкубировали в течение 2 ч при 37 °C. После промывки буфером PBST лунки инкубировали в течение 1 ч с поликлональными антителами к SEMA3A, затем раствор удаляли и проводили трехкратную промывку. Далее после инкубации с вторичными антителами, меченными пероксидазой хрена (HRP), раствор удаляли и снова проводили трехкратную промывку. После добавления субстратного раствора лунки инкубировали в течение 15–25 мин при 37 °C. В завершение в лунки добавляли по 50 мкл стоп-раствора и немедленно проводили измерение оптической плотности при 450 нм. Результаты, представленные на рисунке 1, демонстрируют дозозависимую активность связывания SEMA3A с NRP1.