Active Semaphorin 3F (SEMA3F) (APL930Hu01)

Семафорин-3F (SEMA3F), являющийся членом семейства семафоринов, характеризуется наличием сигнального пептида секреции, sema-домена длиной 500 аминокислот и 16 консервативных остатков цистеина. Семафорины участвуют не только в направлении роста аксонов в процессе развития, но и играют важную роль в иммунной функции (классы 4, 6 и 7) и остеогенезе. Класс 3 представляет собой наиболее разнообразную группу семафоринов, среди которых наиболее изучен Sema3a; при этом ген SEMA3F часто делегирован или его экспрессия снижена во многих метастатических опухолях. Для оценки влияния SEMA3F на ингибирование пролиферации клеток карциномы легкого человека линии A549 высевали в трех повторностях в 96-луночные планшеты из расчета 5000 клеток на лунку и оставляли для адгезии. После инкубации в бессывороточной среде в течение ночи среду заменяли на стандартную DMEM с добавлением 2% сыворотки, после чего вносили рекомбинантный человеческий SEMA3F в различных концентрациях. Через 48 часов инкубации клетки исследовали с помощью инвертированного микроскопа, а пролиферацию оценивали с использованием набора Cell Counting Kit-8 (CCK-8). Для этого в каждую лунку добавляли по 10 мкл раствора CCK-8, инкубировали планшет при 37°C в течение 1–4 часов и измеряли оптическую плотность при длине волны 450 нм на микропланшетном ридере. Результаты микроскопического анализа пролиферации клеток A549 после 48-часовой инкубации с SEMA3F представлены на рисунке 1. Оценка жизнеспособности клеток методом CCK-8 после 48-часовой инкубации с рекомбинантным SEMA3F показана на рисунке 2. Было установлено, что SEMA3F достоверно повышал жизнеспособность клеток A549. (A) Клетки A549, культивируемые в среде DMEM и стимулированные 100 нг/мл SEMA3F в течение 48 ч; (B) Нестимулированные клетки A549, культивируемые в среде DMEM в течение 48 ч. Ингибирование пролиферации клеток A549 при стимуляции SEMA3F.