Active Sirtuin 4 (SIRT4) (APE914Hu01)

Сиртуин 4 (SIRT4), являющийся митохондриальной АДФ-рибозилтрансферазой и регулятором окисления жирных кислот, был протестирован на взаимодействие с белком теплового шока 60 кДа (HSPD1) с помощью связывающего ИФА. Рекомбинантный человеческий SIRT4 последовательно разводили в фосфатно-солевом буфере (PBS) с 0,01% БСА (pH 7,4) и вносили по 100 мкл в лунки планшета, покрытые рекомбинантным человеческим HSPD1. После инкубации в течение 2 ч при 37°C лунки промывали PBS-T и инкубировали 1 ч с поликлональными антителами к SIRT4, после чего снова промывали три раза. Далее проводили инкубацию с вторичными антителами, меченными пероксидазой хрена (HRP), с последующей трехкратной промывкой. После добавления субстратного раствора лунки инкубировали 15–25 мин при 37°C, реакцию останавливали добавлением 50 мкл стоп-раствора и немедленно измеряли оптическую плотность при 450 нм. Результаты (рис. 1) продемонстрировали дозозависимое связывание SIRT4 с HSPD1.