Active Spleen Tyrosine Kinase (SYK) (APE275Hu01)

Проводили анализ связывания методом ИФА для оценки взаимодействия рекомбинантного человеческого тирозинкиназы селезенки (SYK) и рекомбинантного человеческого сиаловую кислоту-связывающего иммуноглобулин-подобного лектина 1 (SIGLEC2). SYK последовательно разводили в фосфатно-солевом буфере (PBS) с добавлением 0,01% бычьего сывороточного альбумина (БСА, pH 7,4). Образцы объемом 100 мкл в двух повторностях вносили в лунки планшета, покрытые SIGLEC2, и инкубировали в течение 2 ч при 37°C. После промывки буфером PBST лунки инкубировали в течение 1 ч с поликлональными антителами к SYK, затем раствор удаляли и проводили трехкратную промывку. Далее вносили вторичные антитела, меченные пероксидазой хрена (HRP), после чего снова удаляли раствор и трехкратно промывали лунки. Добавляли субстратный раствор и инкубировали 15–25 мин при 37°C. Реакцию останавливали добавлением 50 мкл стоп-раствора и немедленно измеряли оптическую плотность при 450 нм. Результаты, представленные на рисунке 1, демонстрируют дозозависимое связывание между SYK и SIGLEC2.