Active Stromal Cell Derived Factor 1 (SDF1) (APA122Hu02)

SDF1 (фактор, происходящий из стромальных клеток 1), также известный как хемокин C-X-C-мотива 12, представляет собой хемокиновый белок, обладающий хемотаксической активностью в отношении Т-лимфоцитов и моноцитов. Предполагается, что SDF1 стимулирует миграцию моноцитов и Т-лимфоцитов через свои рецепторы CXCR4 и ACKR3. В связи с этим для оценки хемотаксического эффекта SDF1 на линию человеческих моноцитарных клеток THP-1 был проведен хемотаксический анализ с использованием 24-луночной системы микрохемотаксиса. Кратко: клетки THP-1 высевали в верхние камеры (100 мкл клеточной суспензии, концентрация 10⁶ кл/мл в среде RPMI 1640 с 0,5% эмбриональной бычьей сыворотки), а SDF1 (в концентрациях 10 нг/мл, 30 нг/мл и 60 нг/мл, разведенных в бессывороточной среде RPMI 1640) добавляли в нижние камеры. Камеры были разделены поликарбонатным фильтром с размером пор 8 мкм. После инкубации при 37 °C в атмосфере с 5% CO₂ в течение 3 ч фильтр удаляли. Клетки, мигрировавшие в нижнюю камеру, визуализировали с помощью инвертированного микроскопа при малом увеличении (×100), после чего проводили подсчет мигрировавших клеток при большом увеличении (×400) случайным образом в пяти полях зрения для каждого фильтра. Результаты показали, что SDF1 способен индуцировать миграцию клеток THP-1. На Рисунке 1 представлены мигрировавшие клетки THP-1 в нижней камере, визуализированные при малом увеличении (×100). Для статистического анализа случайным образом выбирали пять полей зрения для каждой камеры и подсчитывали количество мигрировавших клеток при большом увеличении (×400); статистические данные приведены на Рисунке 2. Оптимальная хемотаксическая активность SDF1 наблюдалась при концентрации 10 нг/мл.