Active Stromal Cell Derived Factor 1 (SDF1) (APA122Ra01)

Стромальный фактор 1 (SDF1), также известный как хемокин CXCL12, представляет собой хемокиновый белок, обладающий выраженной хемотаксической активностью в отношении лимфоцитов. В ходе эмбриогенеза он направляет миграцию гемопоэтических клеток из фетальной печени в костный мозг и участвует в формировании крупных кровеносных сосудов. CXCL12 также проявляет хемотаксическую активность в отношении мезенхимальных стволовых клеток и экспрессируется в зонах воспалительной деструкции костной ткани, где опосредует их супрессивное влияние на остеокластогенез. Кроме того, хемокиновый рецептор CCR1 был идентифицирован как партнер взаимодействия SDF1; в связи с этим был проведен связывающий ИФА для детекции взаимодействия рекомбинантного крысиного SDF1 и рекомбинантного крысиного CCR1. Кратко: SDF1 серийно разводили в фосфатно-солевом буфере (PBS) с добавлением 0,01% бычьего сывороточного альбумина (БСА, pH 7,4). Дубликатные пробы объемом 100 мкл вносили в лунки микропланшета, покрытые CCR1, и инкубировали в течение 2 ч при 37°C. Лунки промывали буфером PBST и инкубировали в течение 1 ч с поликлональными антителами к SDF1, после чего раствор удаляли и проводили трехкратную промывку. Затем лунки инкубировали с вторичными антителами, меченными пероксидазой хрена (HRP), после чего снова удаляли раствор и трехкратно промывали. После добавления субстратного раствора лунки инкубировали в течение 15–25 мин при 37°C. В завершение в лунки добавляли по 50 мкл стоп-раствора и немедленно проводили измерение оптической плотности при 450 нм. Активность связывания SDF1 с CCR1 представлена на рисунке 1; данный эффект носил дозозависимый характер.