Active Superoxide Dismutase 1 (SOD1) (APB960Eq01)

Супероксиддисмутаза 1 (SOD1) - это фермент, кодируемый у человека геном SOD1 и принадлежащий к семейству супероксиддисмутаз (SOD). SOD представляют собой антиоксидантные ферменты, катализирующие дисмутацию двух супероксид-радикалов с образованием пероксида водорода и кислорода. Согласно литературным данным, в слабо щелочном буферном растворе (pH 8,2) на основе трис(hydroxymethyl)аминометана-HCl (Tris-HCl) пирогаллол подвергается автоокислению на воздухе, которое ингибируется SOD. Данный принцип был использован для измерения активности рекомбинантной SOD1 лошади. Реакцию проводили путем добавления 8,5 мкл 5 ммоль/л раствора пирогаллола к 200 мкл 50 ммоль/л раствора Tris-HCl с последующим быстрым перемешиванием при 25 °C; кинетические измерения оптической плотности при длине волны 325 нм (с использованием 50 ммоль/л Tris-HCl в качестве холостого контроля) выполняли в течение 3 минут на микропланшетном ридере, контролируя скорость автоокисления пирогаллола на уровне 0,70 ед. оптической плотности в минуту. Различные концентрации рекомбинантной SOD1 лошади вносили в 200 мкл 50 ммоль/л раствора Tris-HCl, инкубировали в течение 20 минут при 25 °C, после чего в каждую лунку добавляли 8,5 мкл 5 ммоль/л раствора пирогаллола, быстро перемешивали и проводили кинетические измерения при 325 нм в течение 3 минут. В данных условиях единицей активности принято количество фермента, обеспечивающее 50%-ное ингибирование скорости автоокисления пирогаллола в минуту. Удельная активность рекомбинантной SOD1 лошади составила 126,6 Ед/мг.