Active Superoxide Dismutase Copper Chaperone (APA596Hu01)

Супероксиддисмутаза-медный шаперон (SOD4) - фермент, кодируемый у человека геном CCS и относящийся к семейству супероксиддисмутаз (SOD); эти антиоксидантные ферменты катализируют дисмутацию двух супероксид-радикалов с образованием пероксида водорода и кислорода. Активность рекомбинантного человеческого SOD4 определяли на основе способности фермента ингибировать автоокисление пирогаллола в слабочелочном буферном растворе (pH 8,2) на основе трис(hydroxymethyl)аминометана-HCl. Реакцию проводили путем добавления 5 мкл 5 ммоль/л пирогаллола к 200 мкл 50 ммоль/л Tris-HCl с последующим быстрым перемешиванием при 25 °C; кинетику реакции регистрировали в течение 3 минут при длине волны 325 нм (в качестве холостого контроля использовали 50 ммоль/л Tris-HCl), контролируя скорость автоокисления пирогаллола на уровне 0,70 оптических единиц/мин. Различные концентрации рекомбинантного человеческого SOD4 вносили в 200 мкл 50 ммоль/л Tris-HCl, инкубировали в течение 20 мин при 25 °C, после чего в каждую лунку добавляли 5 мкл 5 ммоль/л пирогаллола, быстро перемешивали и регистрировали кинетику при 325 нм в течение 3 минут. В данных условиях единицей активности принято количество фермента, обеспечивающее 50%-ное ингибирование автоокисления пирогаллола в минуту. Удельная активность рекомбинантного человеческого SOD4 составила 97 Ед/мг.