Active Superoxide Dismutase Copper Chaperone (APA596Mu01)

Супероксиддисмутаза медный шаперон (SOD4) - фермент, кодируемый у человека геном CCS и относящийся к семейству супероксиддисмутаз (SOD); эти антиоксидантные ферменты катализируют дисмутацию двух супероксид-радикалов с образованием пероксида водорода и кислорода. Согласно отчету, в слабо щелочном буферном растворе (pH 8,2) на основе Tris-HCl пирогаллол подвергается автоокислению на воздухе, которое ингибируется SOD; данный принцип был использован для измерения активности рекомбинантной мышиной SOD4. Реакцию проводили путем добавления 8 мкл 5 ммоль/л пирогаллола к 200 мкл 50 ммоль/л Tris-HCl, быстрого перемешивания при 25 °C и регистрации оптической плотности при 325 нм (в качестве холостого контроля использовали 50 ммоль/л Tris-HCl) в кинетическом режиме в течение 3 минут на микропланшетном ридере, контролируя скорость автоокисления пирогаллола на уровне 0,70 ед. оптической плотности в минуту. Различные концентрации рекомбинантной мышиной SOD4 вносили в 200 мкл 50 ммоль/л Tris-HCl, инкубировали 20 минут при 25 °C, после чего в каждую лунку добавляли 8 мкл 5 ммоль/л пирогаллола, быстро перемешивали и регистрировали показания при 325 нм в кинетическом режиме в течение 3 минут. В данных условиях единицей активности принято количество фермента, обеспечивающее 50%-ное ингибирование автоокисления пирогаллола в минуту. Удельная активность рекомбинантной мышиной SOD4 составила 66,88 Ед/мг.